SMART技術是利用逆轉錄酶內源的末端轉移酶活性,只需少量的Total RNA就可得到高質量、高產量的cDNA文庫,更重要的是得到的cDNA能夠代表原有樣品中的mRNA的豐度,可以應用于直接擴增基因、構建cDNA文庫、已知序列釣全長cDNA以及用于芯片檢測探針的擴增等。

SMART (Switching Mechanism At 5'end of the RNA Transcript)技術是在合成cDNA的反應中通過使用3'末端帶Oligo(dG)的引物,在逆轉錄酶的作用下以mRNA為模板合成cDNA的一種實驗技術。其利用真核mRNA 的5'未端特有的“帽子結構”,使用SMART引物的Oligo(dG)與合成cDNA末端配對后形成cDNA的延伸模板,逆轉錄酶會自動轉換模板,繼續(xù)延伸cDNA單鏈直到引物的末端,并通過RT-PCR合成第二鏈獲得dS-cDNA。由于有5'帽子結構的mRNA才能利用這個反應得到能擴增的cDNA,因此擴增得到的cDNA就是全長cDNA。
客戶提交實驗材料詳細信息(建庫組織樣品或總RNA,候選蛋白序列信息)—總RNA提取cDNA合成及載體重組—轉化大腸桿菌或酵母菌制備文庫—文庫質量檢測及質粒提取—誘餌菌株自激活檢測及互作篩選—數據采集及處理并撰寫提交實驗報告。
(1)提供足量的大腸文庫甘油菌和文庫質?;蛘呓湍肝膸旄视途?文庫容量>1x107 CFU、陽性率>95%);
(2)詳細的word電子版實驗報告(含原始實驗數據);
(3)陽性克隆測序結果。